【試驗目的和原理】
ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。
對于成年個體被檢者，紅細胞上的A和/或B抗原與血漿中的抗A和/或抗B抗體存在一種對應關(guān)系。其獨特性質(zhì)在于：紅細胞上缺乏A和/或B抗原，則血清中存在與所缺乏的抗原對應的強反應性抗體，如紅細胞上缺乏A抗原，則可以預見血漿中存在抗A抗體。
常規(guī)的ABO定型必須包括正定型（紅細胞定型）和反定型（血漿定型），并將正反定型結(jié)果相互驗證，如果紅細胞發(fā)生凝集，預期其凝集強度≥2+；只有正反定型結(jié)果一致時才能準確定型。
然而，有時ABO正定型和反定型會出現(xiàn)結(jié)果不一致現(xiàn)象，或陽性反應強度弱于2+。引起正反定型結(jié)果不一致因素有：
（一）正定型出現(xiàn)弱反應或缺失抗原
1. A亞型、B亞型或AB亞型。
2. 白血病導致A或B抗原減弱。
3. 何杰金病（Hodgkin’s）有時會抑制抗原表達，與白血病類似。
4. 由于某種疾?。ㄈ绺骨话?、胰腺癌）導致血漿中存在大量的型物質(zhì)，中和抗A或抗B抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。需要將正定型的紅細胞用生理鹽水洗滌后再次定型可解決此問題。
5. 骨髓移植
6. 非ABO同型輸血
（二）正定型紅細胞上多余的抗原反應
1. 自身凝集紅細胞、抗體致敏紅細胞導致。
2. 細胞未洗滌，血漿蛋白引起的假陽性反應。
3. 細胞未洗滌，血漿中存在針對正定型試劑中某種成分的抗體導致。
4. 骨髓移植。
5. 獲得性B。
6. B（A）現(xiàn)象。
7. ABO非相合輸注。
（三）正定型出現(xiàn)混合視野反應
1. 近期輸血。
2. 骨髓移植。
3. 異卵雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。
4. 胎兒和母體出血。
5. A3亞型。
（四）反定型血清中出現(xiàn)弱反應或反應缺失
1. 年齡相關(guān)：新生兒以及小于6月齡的嬰兒以及老年人。
2. ABO亞型有亞型抗體，如A2、A2B型人的抗A1。
3. 低球蛋白血癥（如白血病人、使用免疫抑制劑患者、免疫缺陷患者）。
4. 移植患者使用抗排異藥物。
5. 雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。
（五）反定型出現(xiàn)多余的抗體反應
1. 冷自身抗體。
2. 特異性冷同種抗體。
3. 血清中存在針對試劑紅細胞保存液成分的抗體。
4. 某些疾病導致球蛋白水平增高（多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、Hodgkin’s 淋巴瘤）引起緡錢狀凝集。
5. 輸用大分子血漿擴容劑。
6. 非ABO同型的移植。
7. 靜脈注射免疫球蛋白。
（六）技術(shù)方面的錯誤
1. 血液樣本被污染，如混入其他人樣本。
2. 被檢紅細胞的濃度過高或過低。
3. 忘記在反應體系中加入檢測樣本或試劑。
4. 未按照試劑使用說明進行試驗。
5. 離心步驟離心時間不足或離心時間超時。
6. 對試驗結(jié)果記錄或判讀不正確。
為了解決ABO亞型引起的ABO正反定型不一致以及正定型紅細胞上抗原產(chǎn)生弱反應或抗原反應性缺失，可以使用ABO亞型定型卡來輔助血型鑒定。
ABO亞型定型卡系采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將生物化學的凝膠分子篩過濾技術(shù)、離心技術(shù)和血型血清學的抗體特異性結(jié)合在一起。每卡有八個凝膠管，其中抗A凝膠管灌注了含抗A抗體的凝膠；抗A1凝膠管灌注了含抗A1抗 體的凝膠；抗B凝膠管灌注了含抗B抗體的凝膠；抗AB凝膠管灌注了含抗AB抗體的凝膠；抗H凝膠管灌注了含抗H抗體的凝膠；A細胞、B細胞及Ctl管中灌 注了不含血型抗體的凝膠，A細胞、B細胞用于檢測血漿中的抗體，Ctl管用于自身對照。當抗原抗體反應時，凝集的紅細胞在離心力的作用下不能通過凝膠而留 在凝膠上層或游離在凝膠中，呈現(xiàn)陽性反應；而抗原抗體沒有反應時，未凝集的紅細胞在離心力的作用下可通過凝膠而沉積在微柱凝膠管的底部，呈現(xiàn)陰性反應。
【ABO亞型定型卡的用途】
鑒定紅細胞上的ABO抗原，解決亞型引起ABO正反定型不一致、以及正定型紅細胞上抗原產(chǎn)生弱反應或抗原反應性缺失的問題。
【樣本要求】
1. 建議使用抗凝的血樣，尤其是EDTA抗凝管采集的血樣，需要量2ml。（EDTA抗凝采血管為紫帽管）。
2. 血液樣本在采集后48小時以內(nèi)檢測。
【所需儀器設備及耗材】
1. ABO亞型定型卡
2. 血型血清學離心機（用于離心分離血漿、洗滌紅細胞）
3. 微柱凝膠卡離心機
4. 微量移液槍及吸頭
【試驗操作】
一、被檢血液樣本的處理
1. EDTA抗凝的血液樣本離心3000rpm 1分鐘，將上清血漿轉(zhuǎn)入一支12×75mm試管中備用，得到壓積紅細胞。
2. 另取一支12×75mm試管中，加入0.1ml上述步驟1中的壓積紅細胞 ，用生理鹽水洗滌一次，棄上清，得到壓積紅細胞。
3. 在一支12×75mm 試管中，加入1ml生理鹽水（或LISS液），加入步驟2中得到的壓積紅細胞10μl，混勻得到0.8~1%的被檢紅細胞懸液。
二、 紅細胞定型
1. 取ABO亞型定型卡一片，注意檢查外觀，確保凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會干枯。將符合要求的卡進行標記，按照試驗需要撕開封口膜。
2. 用微量移液槍分別向每孔樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50μl 0.8~1%的被檢者紅細胞懸液。
3. 在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的液體在卡的樣品槽中呈水平狀態(tài)，而不是偏向一側(cè)。
4. 將卡放入微柱凝膠卡離心機離心，LB-3000低速離心機一檔離心900rpm 2分鐘，再1500rpm 3分鐘，判讀結(jié)果并記錄。
【結(jié)果判讀及解釋】
1. 反應陰、陽性的判讀
2. 陰陽性結(jié)果解釋
(1) 陽性結(jié)果：紅細胞浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應。
(2) 陰性結(jié)果：紅細胞全部沉于微柱凝膠的底部。
(3) 血型亞型鑒定需要根據(jù)正反定型結(jié)果來判定，結(jié)果判定可參考下表。
注：mf=混合視野，w=弱反應。
【注意事項】
1. 建議在使用凝膠卡前先離心再應用。
2. 若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸或有氣泡，不可使用。
3. 撕開凝膠卡封口膜時，不能用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。
4. 樣本采集后應盡快檢測，若試驗需要延遲，應將樣本置2~8℃下短期儲存。
5. 紅細胞懸液的濃度為0.8~1%，濃度過高或過低會影響檢測結(jié)果。
6. 溶血、脂血、細菌污染等情況的標本會影響檢測結(jié)果。
7. 血漿或血清標本須充分離心去除纖維蛋白，否則會阻止紅細胞在微柱凝膠中的沉降，出現(xiàn)假陽性。
8. 在Ctl孔（自身陰性對照）結(jié)果為陽性時，試驗結(jié)果無效?？赡茉蚴怯捎诒粰z紅細胞已經(jīng)致敏IgM抗體導致自發(fā)凝集，此時可以用DTT將已經(jīng)致敏到紅細胞上的IgM抗體破壞后再行試驗。
9. 人源血液樣本存在潛在的傳染性，凝膠卡使用后按醫(yī)療生物垃圾處理。
